Жидкость Карнуа. Служит хорошим фиксатором, как для гистологических исследований (ядра), так и для многих гистохимических методик (нуклеиновые кислоты, белки, полисахариды). Недостатком является легкое сморщивание цитоплазмы и соединительной ткани.
Состав и метод применения:
абсолютный этиловый спирт 60 мл
(при отсутствии можно заменить 96° спиртом)
хлороформ 30 мл
ледяная уксусная кислота 10 мл

Жидкость Мюллера. В настоящее время применение ее в чистом виде ограничено. Однако она служит исходным раствором для приготовления таких распространенных фиксаторов, как жидкость Ценкера, Орта, Максимова и др. Состав:
* двухромовокислый калий - 2,5 г
* сернокислый натрий - 1 г
* дистиллированная вода - 100 мл

Для лучшего растворения бихромата калия рекомендуется подогревать воду.
Жидкость Ценкера (сулемовая смесь). Один из лучших фиксаторов для приготовления обзорных препаратов и препаратов для ряда тонких гистологических исследований. Обеспечивает хорошую окрашиваемость тканей. Состав и способ употребления:
* жидкость Мюллера - 100 мл
* сулема (НgСL2) - 5 г
* ледяная уксусная кислота - 5 мл

Следует помнить, что излишнее пребывание объекта в фиксирующих жидкостях отрицательно сказывается на качестве получаемых препаратов, ибо ткани становятся хрупкими, ухудшается их окрашиваемость, наступает сжатие или набухание и т. д. Лишь некоторые фиксаторы пригодны для длительного хранения материала (10% формалин, жид¬кость Буэна).
В большинстве случаев фиксация производится при комнатной температуре. Однако для некоторых специальных исследований (особенно гистохимических и электронномикроскопических) применяют фиксацию охлажденными жид¬костями при температуре +4,0° и ниже.

Для того чтобы успешно осуществить процесс фиксации необходимо придерживаться определенных правил:
1. Размер исследуемых кусочков должен быть таким, чтобы про-изошло полное его пропитывание в оптимальные для данного фиксатора сроки. Решающее значение при этом имеет диффузионная способность фиксирующих жидкостей, которая у разных фиксаторов далеко не одинакова. Например, низкой диффузионной способностью обладают осмий, пикриновая кислота, платина, высокой – формалин, трихлоруксусная и уксусная кислоты, метиловый спирт и др. При фиксации ткани печени 1% осмиевой кислотой в течение 4 часов последняя проникает на глубину лишь 0,5-1 мм, в то время как кон-центрированный формалин за это же время успевает проникнуть на 4-5 мм. Следовательно, для фиксации осмием надо брать более тонкие кусочки (3-5 мм), чем для обработки формалином (10-15 мм). В среднем же для большинства фиксаторов берут кусочки толщиной 5-10 мм.

Ввиду того, что лишенные питания ткани организма очень быстро начинают претерпевать необратимые изменения (будь то смерть цело-го организма или искусственное удаление отдельных его частей), первым и обязательным условием микроскопической техники являются предупреждение и задержка посмертных изменений в тканях. Это достигается путем фиксации взятого для исследования материала.
Фиксация, как указывает сам термин, представляет со¬бой закрепление, сохранение в обрабатываемом кусочке органа того строения, которое он имел при жизни. В основе действия фиксаторов лежат физико-химические процессы и в первую очередь процесс коагуляции белков.

Приготовление раствора гематоксилина
Добавить 2 г гематоксилина в 100 мл 96 % спирта, к полученному раствору добавить дистиллированную воду в количестве 100 мл, калийных квасцов 3 г, ледяной уксусной кислоты 10 мл. Прибавлять эти вещества нужно в строгой последовательности. Калийные квасцы должны быть химически чистые. Для того, чтобы произошло полное окисление гематоксилина (то есть для того, чтобы образовался гематоксилин) приготовленный раствор должен не менее 15 дней находиться в тёмном месте при доступе воздуха (для этой цели банка с раствором должна быть закрыта бумажным колпаком или сложенной в 3-4 слоя марлей). О созревании раствора можно судить по его цвету: светло-красный становится тёмно-красным через 15 дней. Раствор необходимо время от времени взбалтывать – это ускорит его созревание. Раствор очень долго сохраняется в банках с притертой пробкой.

1. Сполоснутый срез (замораживающий микротом) в водопровод-ной воде перенести в чашку с раствором гематоксилина на несколько минут (10-15 мин.)
2. Хорошо сполоснуть срез в водопроводной воде.
3. Дифференцировать в солянокислом спирте (1-% соляной кисло-ты в 70-% спирте), при этом срез из тёмно-фиолетового, фиолетово-синего, чёрно-синего становится коричневато-фиолетовым или коричневато-красным (5-6 капель соляной кислоты на 100 мл 70-% спирта).
4. Сполоснуть срез большим количеством водопроводной воды не-сколько раз до посинения.
5. Перенести срез в слабый раствор нашатырного спирта – аммиака (в дистиллированную воду накапать 3 капли нашатырного спирта; в такой щелочной среде срезы становятся синими (10мин.)).
6. Хорошо сполоснуть срез в дистиллированной воде несколько раз (в течение 15 минут).
7. Окрасить срез эозином (3-5 мин.)

Современная гистология располагает большим арсеналом средств для изучения биологических структур на всех уровнях их организации – клеточном, тканевом, органном. Основными объектами исследования являются гистологические препараты или их фотографии, классическим методом – микроскопирование.
Световая микроскопия наиболее распространенный способ изучения гистологических структур. Современные биологические микроскопы дают максимальное (до 2500 раз) увеличение (произведение увеличения объектива на увеличение окуляра).

Наклеивают парафиновые срезы на чистые обезжиренные предметные стекла, смазанные белком с глицерином. Для приготовления последнего свежий яичный белок взбивают шпателем и фильтруют через смоченный дистиллированной водой бумажный фильтр. К профильтрованному белку добавляют равный объем глицерина, смешивают и кладут для предупреждения загнивания 2-3 кусочка тимола величиной с зернышко пшеницы. В закрытой склянке белок с глицерином хранится длительное время. Маленькую капельку белка с глицерином наносят на предметное стекло и пальцем размазывают тонким слоем по стеклу. Если срезы были помещены в чашку с дистиллированной водой, белок на стекле коагулируют, подержав стекло над спиртовкой белком вверх. Затем расправленный срез при помощи кисточки вылавливают из воды и переносят на стекло. Осторожно наклоняя предметное стекло, дают воде стечь и затем на 12-24 ч стекло переносят в термостат с температурой 37°С.

Блок фиксируют в объектодержателе так, чтобы длинная ось блока располагалась вдоль длинной оси микротома, а поверхность блока горизонтальной. Очень важна правильная установка ножа. Оптимальным углом наклона ножа считается такой, когда плоскость фасетки совпадает с плоскостью среза. На практике угол наклона ножа обычно несколько больше оптимального. Если угол наклона ножа слишком велик, материал будет крошиться, если слишком мал, нож будет 1-2 раза проскальзывать над блоком, а потом срезать толстый срез.
Парафиновые блоки режут прямым ножом, целлоидиновые – плосковогнутым. При резке парафиновых блоков нож устанавливают перпендикулярно оси микротома или слегка под углом. И последнем случае нельзя получить серийных срезов, но зато очень плотные и трудно режущиеся объекты режутся легче. При резке целлоидиновых срезов нож устанавливают под углом.
Когда нож установлен, к нему осторожно подводят блокодержатель с блоком и одновременно придвигают нож к блоку. Подачу объектодержателя осуществляют с помощью кремальеры, расположенной в основании объектодержателя, либо рукой, толкая санки объектодержателя вдоль наклонных рельсов. Когда блок и нож сближены, проверяют горизонтальность верхней поверхности блока, которая не должна доходить до лезвия ножа на 0,5-1 мм. После этого устанавливают микрометрическую шкалу на получение толстых срезов (30 мкм) и движением салазок ножа начинают подавать блок вверх до тех пор, пока не начинают получаться первые полные срезы, затем микрометрическую шкалу следует установить на необходимую толщину срезов. Парафиновые срезы диаметром 7-10 мкм.
При очень хорошо залитом материале и хорошо наточенном ноже можно получить срезы толщиной 3-5 мкм. Толщина целлоидиновых срезов обычно составляет 12-15 мкм.

Приготовление тотальных препаратов используется довольно часто.
В некоторых случаях объект исследуют целиком без приготовления срезов и, следовательно, без предварительного уплотнения. Обычно такими объектами являются тонкие структуры – серозные, мозговые, зародышевые оболочки, тонкостенные сосуды и т. д.
Препараты объектов, исследуемых целиком, называются тотальными.

Микротомные ножи бывают прямые (когда обе стороны ножа плоские) и плосковогнутые (одна сторона плоская, другая – вогнутая). Первые применяются для получения парафиновых, вторые – для получения целлоидиновых срезов. Кроме того, существуют двояковогнутые микротомные ножи. В месте пересечения плоскостей широких поверхностей микротомного ножа образуется угол, называемый углом лезвия . Микротомные ножи затачиваются под углом, большим, чем угол лезвия, и этот угол заточки называется режущим углом. Плоскости заточек микротомного ножа, образующие режущий угол, получили название фасеток. Ширина фасеток должна быть 1,5-2 мм.
Точка микротомных ножей имеет важное значение в работе лаборанта-гистолога, так как именно от состояния ножа зависит качество среза. Ножи подвергают электролитической точке либо точат на точильных камнях. Электролитическая точка основана на растворении металла в электролите под действием электрического тока. При этом режущий край истончается и образуется фасетка. Точка на точильных камнях производится на брусках бельгийского камня с мелким зерном и затем на белом камне – арканзасе с еще более мелким зерном. На стержень ножа надевают ручку, а на спинку прямого ножа – обушок.