Наука » Медицина » Гистология
Следует помнить, что излишнее пребывание объекта в фиксирующих жидкостях отрицательно сказывается на качестве получаемых препаратов, ибо ткани становятся хрупкими, ухудшается их окрашиваемость, наступает сжатие или набухание и т. д. Лишь некоторые фиксаторы пригодны для длительного хранения материала (10% формалин, жид¬кость Буэна).
В большинстве случаев фиксация производится при комнатной температуре. Однако для некоторых специальных исследований (особенно гистохимических и электронномикроскопических) применяют фиксацию охлажденными жид¬костями при температуре +4,0° и ниже.
Помимо фиксации кусочков органов и тканей в фиксирующих жидкостях, существует метод прижизненной фиксации органов или целого организма пропусканием (перфузией) фиксатора через кровеносные сосуды.
Этот способ особенно ценен для исследований, при которых требуется максимально сократить время между прекращением жизнедеятельности исследуемого объекта и на¬чалом фиксации (некоторые гистохимические и гистологические методы), а также зафиксировать це-ликом крупный орган или весь организм.
Для этих целей необходимо взять две бутылки, имеющие выпускные приспособления внизу (емкость сосудов подбирается в зависимости от размеров объекта). На отводные стеклянные трубочки, выступающие из нижних пробок, надевают резиновые трубки, которые натя-гивают на ответвления тройника. Желательно, чтобы ветви тройника имели краны; если же их нет, то нужно приспособить зажимы к трубкам. На оставшуюся свободной (отводящую) ветвь тройника также надевают резиновую трубку, соединенную со стеклянной канюлей (размер канюли подбирают в зависимости от диаметра сосуда). Одну из бутылей наполняют физиологическим раствором, другую фиксирующей жидкостью. Обе бутыли закрепляют в штативе на высоте, достаточной для обеспечения нужного давления жидкости . В случае надобности бутыли можно снабдить манометром и грушей для нагнетания воздуха. Когда система подготовлена, ее заполняют, обращая особое внимание на то, чтобы нигде не было пузырьков воздуха, так как они могут закупорить сосуд и нарушить прохождение фикса-тора. Лишь по окончании всей подготовительной работы животному дают наркоз, привязывают к станку и обнажают оперативным путем артерию и вену подлежащего фиксации органа. Артерию берут на две шелковые нити, приподнимают, надрезают стенку маленькими остро-конечными кривыми ножницами и вводят канюлю по ходу кровотока.
Закрепив последнюю с помощью одной из нитей, вскрывают вену и, открыв кран, начинают пропускать физиологический раствор (периферический конец артерии перевязывают оставшейся второй нит-кой). Как только из вены вместо крови появится светло-розовая жид-кость, введение физиологического раствора прекращают и начинают вводить фиксирующую жидкость до тех пор, пока она не начнет вытекать из вены. После этого перевязывают вену и, когда ток жидкости из бутылки прекратится, перевязывают артерию. Затем извлекают орган и кладут в фиксирующую жидкость. Если нужно фиксировать все животное целиком, то наливку производят через аорту или левый желуочек сердца.
Важным моментом является переключение системы с физиологическим раствором на фиксирующую жидкость. Раннее переключение приводит к фиксации сосудов, заполненных кровью, что служит препятствием к дальнейшему прохождению фиксатора, позднее вызовет нарушение проницаемости сосудистых стенок и отек тканей.
В большинстве случаев фиксация производится при комнатной температуре. Однако для некоторых специальных исследований (особенно гистохимических и электронномикроскопических) применяют фиксацию охлажденными жид¬костями при температуре +4,0° и ниже.
Помимо фиксации кусочков органов и тканей в фиксирующих жидкостях, существует метод прижизненной фиксации органов или целого организма пропусканием (перфузией) фиксатора через кровеносные сосуды.
Этот способ особенно ценен для исследований, при которых требуется максимально сократить время между прекращением жизнедеятельности исследуемого объекта и на¬чалом фиксации (некоторые гистохимические и гистологические методы), а также зафиксировать це-ликом крупный орган или весь организм.
Для этих целей необходимо взять две бутылки, имеющие выпускные приспособления внизу (емкость сосудов подбирается в зависимости от размеров объекта). На отводные стеклянные трубочки, выступающие из нижних пробок, надевают резиновые трубки, которые натя-гивают на ответвления тройника. Желательно, чтобы ветви тройника имели краны; если же их нет, то нужно приспособить зажимы к трубкам. На оставшуюся свободной (отводящую) ветвь тройника также надевают резиновую трубку, соединенную со стеклянной канюлей (размер канюли подбирают в зависимости от диаметра сосуда). Одну из бутылей наполняют физиологическим раствором, другую фиксирующей жидкостью. Обе бутыли закрепляют в штативе на высоте, достаточной для обеспечения нужного давления жидкости . В случае надобности бутыли можно снабдить манометром и грушей для нагнетания воздуха. Когда система подготовлена, ее заполняют, обращая особое внимание на то, чтобы нигде не было пузырьков воздуха, так как они могут закупорить сосуд и нарушить прохождение фикса-тора. Лишь по окончании всей подготовительной работы животному дают наркоз, привязывают к станку и обнажают оперативным путем артерию и вену подлежащего фиксации органа. Артерию берут на две шелковые нити, приподнимают, надрезают стенку маленькими остро-конечными кривыми ножницами и вводят канюлю по ходу кровотока.
Закрепив последнюю с помощью одной из нитей, вскрывают вену и, открыв кран, начинают пропускать физиологический раствор (периферический конец артерии перевязывают оставшейся второй нит-кой). Как только из вены вместо крови появится светло-розовая жид-кость, введение физиологического раствора прекращают и начинают вводить фиксирующую жидкость до тех пор, пока она не начнет вытекать из вены. После этого перевязывают вену и, когда ток жидкости из бутылки прекратится, перевязывают артерию. Затем извлекают орган и кладут в фиксирующую жидкость. Если нужно фиксировать все животное целиком, то наливку производят через аорту или левый желуочек сердца.
Важным моментом является переключение системы с физиологическим раствором на фиксирующую жидкость. Раннее переключение приводит к фиксации сосудов, заполненных кровью, что служит препятствием к дальнейшему прохождению фиксатора, позднее вызовет нарушение проницаемости сосудистых стенок и отек тканей.
Авторское право на материал
Копирование материалов допускается только с указанием активной ссылки на статью!
Информация
Посетители, находящиеся в группе Гости, не могут оставлять комментарии к данной публикации.
Похожие статьи