Этот метод применяется для окрашивания нервных волокон и нервных оконча­ний, а также нервных ганглиев.
Приготовление растворов. 1. Раствор Рингера-Локка. Для тканей млекопитающих используют раствор следу­ющего состава: хлорид натрия (NaCl) – 6 г, хлорид калия (КСl) – 0,25 г, хлорид кальция (СаС12) – 0,25 г, бикарбонат натрия (Na2C03) – 0,25 г, глюкоза – 1,0 г, дистиллированная вода – до 1000 мл.
2. 1% раствор метиленового синего. 1 г химически чистого мети-ленового синего растворяют в 100 мл раствора Рингера-Локка. Раствор может храниться.
3. Фиксирующий раствор молибдата аммония. Непосредственно перед употреблением 5-7 г молибдата аммония растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Раствор фильтруют.
Методика окрашивания.
Введение раствора может осуществляться различными способами:
1) инъекцией в кровяное русло;
2) введением раствора в полость тела (в плевральную или брюшную);
3) инъекцией красящего раствора в соединительную ткань исследуемого органа;
4) помещением кусочка ткани непо­средственно в раствор красителя. В зависимости от исследуемого объекта 1% раствор метиленового синего перед употреблением раз­водят в 2, 4, 6, 8 или 16 раз. Оптимальную концентрацию красителя для данного объекта следует найти эмпирически (на основе соб­ственного опыта).

Приготовление растворов: 1. Раствор гематоксили­на: 1 г гематоксилина растворяют в 10 мл 96% спирта, приливают 90 мл дистиллированной воды и оставляют до созревания (раствор должен приобрести красный цвет). 2. 6% раствор железоаммиачных квасцов. Непосредственно перед употреблением растворы смешивают на часовом стекле в таком отношении, чтобы осадок выпал не раньше чем через 0,5 мин, т. е. через срок, достаточный для окрашивания препарата. Если осадок выпадает через более длительный срок, препарат будет окрашен недостаточно контрастно. В среднем к 5 каплям квасцов прибавляют, встряхивая, 10-12 капель гематоксилина (добавляют гематоксилин в квасцы, а не наоборот).
Изготовление пленочных препаратов. Кожу вместе с подкожной соединительной тканью фиксируют в 10% нейт­ральном формалине .

Покровным стеклом прикасаются к верхушке свежей капли крови, накладывают его на предметное стекло. При этом капля растекается. Для защиты от высыхания покровное стекло окантовывают кисточкой, обмакнутой в расплав­ленный парафин. Если мазок подсыхает, то дискоциты часто агглю­тинируются, образуя «монетные столбики».
Бензидиновый метод выявления пероксидазы. Этот метод может быть использован в качестве примера выявления активности ферментов в лейкоцитах на мазках крови. Для фиксации мазков крови можно использовать 10% спиртовой раствор формалина 1-2 мин (по Грэхему).

Окрашивание мазков крови и красного костного мозга по Романовскому-Гимзе. Продажную краску Романовского-Гимзы разводят из расчета 2 мл краски на 23 мл дистиллированной воды. Фиксированные мазки помещают на две стеклянные палочки, положенные параллельно друг другу, заливают краской и оставляют на 30 мин. Далее краску смывают с мазка водопроводной или дистиллированной водой. От водопроводной воды мазок может слишком посинеть, а дистиллированная вода при длительном промывании смывает краску, поэтому лучше быстро смыть краску дистиллированной водой. Мазки высушивают на воздухе. Далее их можно исследовать с иммерсией, не заключая в бальзам. В случае необходимости высушенные мазки можно заключить в бальзам.
Результат: ядра красновато-фиолетовые, зернистость эозинофилов розовая, зернистость базофилов красно-фиолетовая, зернистость нейтрофилов бледно-розовая, цитоплазма лимфоцитов голубая, цитоплазма моноцитов серовато-голубоватая, кровяные пластинки фиолетовые.

Взятие крови и приготовление мазка является необходимостью в гистологии.
Для взятия крови используют стерильные ланцетовидные иглы, которые быстрым движением вкалывают на глубину 2-3 мм в протертый спиртом кончик пальца. Первую каплю крови стирают, к следующей прикасаются концом обезжиренного предметного стекла. Затем предметное стекло с каплей крови помещают на стол таким образом, чтобы конец стекла с каплей был справа. Шлифованное покровное стекло ставят слева от капли под углом 45° к предметному стеклу и слегка пошевеливают, чтобы капля растеклась вдоль покровного стекла. Тогда легким равномерным движением покровного стекла справа налево по предметному стеклу размазывают каплю крови.

Для взятия крови используют стерильные ланцетовидные иглы, которые быстрым движением вкалывают на глубину 2-3 мм в протертый спиртом кончик пальца. Первую каплю крови стирают, к следующей прикасаются концом обезжиренного предметного стекла. Затем предметное стекло с каплей крови помещают на стол таким образом, чтобы конец стекла с каплей был справа.
Шлифованное покровное стекло ставят слева от капли под углом 45° к предметному стеклу и слегка пошевеливают, чтобы капля растеклась вдоль покровного стекла. Тогда легким равномерным движением покровного стекла справа налево по предметному стеклу размазывают каплю крови.

Смешивают 45 мл ледяной уксусной кислоты и 55 мл дистиллиро-ванной воды для получения 100 мл 45% уксусной кислоты. Добавляют орсеин, после взбалтывания и фильтрации ацетоорсеин готов к употреблению.
2 г кармина растворяют в 100 мл 45% уксусной кислоты. Растворение ведется в колбе с воронкой на водяной бане с подогревом в течение не менее 30 мин. После остывания и фильтрации раствор помещают в посуду с притертой пробкой. Красители имеют вишнево – малиновый цвет.

Научиться готовить микропрепарат – митоз корешка лука , не сложно.
Наиболее доступным объектом для демонстрации митоза в учебном процессе является репчатый лук Alium сера, который имеет в соматических клетках 8 пар хромосом .
Для приготовления препаратов можно использовать корешки либо проросшей луковицы, либо семян.
Для проращивания луковицы берут узкий стеклянный стаканчик, наполняют теплой водой и сверху помещают луковицу так, чтобы основание ее касалось поверхности воды. Когда образуются корни и длина их достигнет 2-3 см., воду меняют на теплую и спустя полчаса фиксируют корни.

Основной раствор кармина. Растворить в 60 мл дистиллированной воды 2 г кармина, 1 г углекислого калия и 5 г хлористого калия. Полученный раствор кипятить в течение 5 минут (не допуская бурного кипения), охладить и отфильтровать. Затем добавить к фильтрату 20 мл 28% раствора аммиака. Хранящийся в холодильнике при 0-4° раствор годен в течение 3 месяцев.
Раствор кармина для окрашивания. Слить 8 мл основного раствора, 12,5 мл аммиака (удельный вес 0,880) и 24 мл метанола (раствор годен 1-2 недели).
Раствор Беста для дифференцировки. К 8 мл абсолютного спирта добавить 4 мл метанола и 10 мл дистиллированной воды.
Метод окрашивания (парафиновые срезы).
1. Довести срезы до абсолютного Спирта.
2. Поместить в 1 % раствор целлоидина на 2-5 минут.
3. Высушить на воздухе.
4. Довести через спирты до воды.
5. Окрасить гематоксилином Эрлиха 5 минут.

Для гистохимического изучения активности и гистотопографии ферментов в тканях общераспространенные методы заливки материала в парафин или целлоидин часто оказываются совершенно непригодными. Высокая температура, необходимая для заливки в парафин, вызывает сильное уплотнение материала и, кроме того, инактивацию многих ферментов. Длительное пропитывание объекта целлоидином также обусловливает инактивацию ферментов и значительное вымывание их из исследуемого материала. Во избежание этих недостатков в гистохимии ферментов в последнее время используют заливку тканей в поливакс или полиэтиленгликоль.

Этот метод сочетает в себе преимущества парафиновой и целлоидиновой заливок. Применять его рекомендуется при обработке:
1) нежных объектов, которые легко сжимаются при парафиновой заливке (мезенхимная ткань, органы кроветворений и др.);
2) органов, которые расслаиваются при резке в парафиновом блоке (трахея, кожа и др.).
Метод. Промывка и обезвоживание стандартные. Из безводного спирта материал помещают в смесь из равных частей спирта с эфиром (4-20 часов), а затем в 2% раствор целлоидина. После полного пропитывания (24-48 часов) объект переносят в чистый хлороформ, где он находится до тех пор, пока не погрузится под его поверхность (30 ми-нут-1 час).

За последние годы в лабораторной практике находит применение способ одновременной заливки кусочков от нескольких сравниваемых органов в единый блок. Для этого подлежащие совместной заливке объекты проводят по спиртовой батарее одновременно и на том этапе, когда необходимо придать кусочкам окончательную форму, обрезают их края так, чтобы в нужной комбинации они могли тесно прилегать друг к другу и в то же время имели бы различную форму, позволяющую определить принадлежность каждого отдельного объекта ). После этого кусочки проводят вместе через промежуточные среды, парафины для пропитывания и укладывают в формочку для заливки в определенном порядке, стараясь сблизить края в процессе заливки.

Схему расположения кусочков и их обозначение сразу же заносят в протокольную тетрадь. Подобные комбинированные блоки можно составлять и из уже залитых отдельно кусочков, придавим в твердом состоянии необходимую форму и поместив затем в горячий парафин, находящийся в термостате.