Этот метод применяется для окрашивания нервных волокон и нервных оконча­ний, а также нервных ганглиев.
Приготовление растворов. 1. Раствор Рингера-Локка. Для тканей млекопитающих используют раствор следу­ющего состава: хлорид натрия (NaCl) – 6 г, хлорид калия (КСl) – 0,25 г, хлорид кальция (СаС12) – 0,25 г, бикарбонат натрия (Na2C03) – 0,25 г, глюкоза – 1,0 г, дистиллированная вода – до 1000 мл.
2. 1% раствор метиленового синего. 1 г химически чистого мети-ленового синего растворяют в 100 мл раствора Рингера-Локка. Раствор может храниться.
3. Фиксирующий раствор молибдата аммония. Непосредственно перед употреблением 5-7 г молибдата аммония растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Раствор фильтруют.
Методика окрашивания.
Введение раствора может осуществляться различными способами:
1) инъекцией в кровяное русло;
2) введением раствора в полость тела (в плевральную или брюшную);
3) инъекцией красящего раствора в соединительную ткань исследуемого органа;
4) помещением кусочка ткани непо­средственно в раствор красителя. В зависимости от исследуемого объекта 1% раствор метиленового синего перед употреблением раз­водят в 2, 4, 6, 8 или 16 раз. Оптимальную концентрацию красителя для данного объекта следует найти эмпирически (на основе соб­ственного опыта).
При проведении окрашивания путем инъекции красителя в кро­вяное русло предварительно раствором Рингера-Локка тщательно вымывают из сосудов кровь. Для этого подогретый до 37° С раствор вводят через канюлю либо в аорту (у мелких животных), либо непо­средственно в артерию органа. 0,25-0,125% раствор метиленового синего, подогретый до 37° С, вводят в сосуд вплоть до появления в поверхностных частях органа микроскопически выявляемой окраски нервных элементов. Обычно инъекция продолжается 30- 40 мин. Затем, если объект плотный, маленькие кусочки органа помещают для докраски в чашку Петри, на дне которой находится фильтровальная бумага, смоченная 0,125% раствором метиленового синего, и наносят на поверхность объекта по каплям раствор красителя. Ход окрашивания контролируют при малом увеличении микроскопа, зажав небольшой кусочек органа между двумя пред­метными стеклами.
Окрашивание погружением объекта в краситель производится так же, как докрашивание, описанное выше. Метод погружения в краситель используют для окрашивания тонких объектов, например стенок полых органов.
Фиксация объекта производится немедленно после окрашивания м растворе молибдата аммония, охлажденного до 1-3° С. Фиксация проводится в холодильнике в течение 2-5 ч. Затем следует про­мывка в дистиллированной воде в течение 1-2 ч, причем воду сме­няют несколько раз.
Перед заключением в бальзам пленочные препараты проводят через 96% и 100% спирты и ксилол. При необходимости приготовить срезы материал после окрашивания заливают в целлоидин.
Как пленочные препараты, так и срезы можно докрасить каким-либо ядерным красителем, например квасцовым кармином