Смешивают 45 мл ледяной уксусной кислоты и 55 мл дистиллиро-ванной воды для получения 100 мл 45% уксусной кислоты. Добавляют орсеин, после взбалтывания и фильтрации ацетоорсеин готов к употреблению.
2 г кармина растворяют в 100 мл 45% уксусной кислоты. Растворение ведется в колбе с воронкой на водяной бане с подогревом в течение не менее 30 мин. После остывания и фильтрации раствор помещают в посуду с притертой пробкой. Красители имеют вишнево – малиновый цвет.
Для приготовления препарата зафиксированные кончики корней переносят из раствора спирта в фарфоровый тигелёк с красителями. Придерживая тигелёк пинцетом, подогревают несколько раз на спиртовке раствор красителя с корнями. Затем корешок вынимают из красителя и кладут его на предметное стекло в каплю 45-% уксусной кислоты.
Отрезают лезвием кончик корня (примерно 2-3 мм), где под чех-ликом находится меристема с делящимися клетками. Остальную часть корня удаляют со стекла. Накрывают покровным стеклом отрезанный кончик и сверху стекла кладут полоску фильтровальной бумаги. Указательным пальцем левой руки придерживают покровное стекло, что-бы оно не двигалось. Спичкой, находящейся в правой руке, постукивают по покровному стеклу, чтобы уложить клетки в один слой.
Удалив фильтровальную бумагу, просматривают препарат под микроскопом. Если получился хороший препарат, то края покровного стекла можно окантовать подогретым парафином или маникюрным лаком, чтобы сохранить на несколько дней для работы. Для окантовки покровное стекло придерживают указательным пальцем левой руки, чтобы оно не двигалось; правой рукой опускают кисточку (для рисования) в жидкий парафин и аккуратно обводят края покровного стекла кисточкой. Клетки окажутся заключенными в среду с 45% уксусной кислотой, где могут сохраняться в течение нескольких дней. Так полу-чают давленные временные препараты.
Для того чтобы временный препарат перевести в постоянный, которым можно пользоваться несколько лет, необходим сухой лёд или термоэлектрический охлаждающий столик (ТОС).
Препарат помещают на поверхность сухого льда или охлаждающего столика. Через 1-3 минуты препарат замораживается, и покровное стекло становится неподвижным. Лезвием отделяют покровное стекло от предметного. Клетки остаются на одном из стёкол или на обоих. Стёкла опускают на несколько секунд для обезвоживания сна-чала в 96-%, а затем в 100-% этиловый спирт, затем в ксилол и заключают в канадский бальзам. Для этого наносят каплю бальзама на предметное стекло и осторожно накрывают чистым покровным стеклом. Рядом капают ещё одну каплю бальзама и помещают обезвоженное покровное стекло, на котором имеются клетки. Препарат сушат при комнатной температуре не менее суток.
На полученных препаратах можно легко найти клетки, зафиксированные в интерфазе и в различных фазах митоза: профаза, метафаза, анафаза и телофаза. Можно также определить митотический индекс (в %) по формуле:
МИ = А/В•100%,
где А – сумма клеток находящихся в различных фазах митоза;
В – общее число интерфазных и делящихся клеток.