Вся посуда должна быть чистой и простерилизованной. Все химические реактивы (компоненты) должны быть ХЧ или ХЧДА. Куриные яйца используют только доброкачественные и из хозяйств благополучных по инфекционным заболеваниям.
Разбавитель готовят непосредственно перед получением спермы и хранят не более 3-4 часов.
– в стерильный сосуд высыпают отвешенные в соответствии с рецептом глюкозу и др. вещества (кроме желтка, глицерина и АБ), вливают дистиллированную воду и размешивают.
Затем среду стерилизуют в течение 5-10 минут в водяной бане и охлаждают до 35-400С.
– куриное яйцо моют щеткой, протирают спиртовым тампоном, раскалывают пополам, сливают белок в банку, а желток осторожно перекладывают на стерильный листок фильтровальной бумаги, покатывают его, чтобы снять остатки белка, прокалывают и сливают в колбу.
– Желток, АБ, глицерин добавляют в среду, когда температура её не выше 400С
Техника разбавления
– сперму разбавляют не позже 5-10 мин. после получения на искусственную вагину.
– разбавитель должен быть t-25-300С.
– в измеренное количество спермы медленно, тонкой струей по стенкам вливают порциями отмеренный объем разбавителя, слегка перемешивая покачиванием.
– Следует иметь в виду, что иногда после разбавления подвижность спермиев несколько снижается, но спустя 10-15 мин восстанавливается.
– расфасовку, разбавление спермы проводят в стерильной помещении или настольном боксе.
– биологический контроль среды определяют по выживаемости спермиев при температуре 2-40 при различных степенях разбавления спермы. Каждая поступающая серия компонентов должна быть проверена на безвредность.
Степень разбавления:
В зависимости от концентрации и активности спермиев сперму производителей сельскохозяйственных животных разбавляют:
– быка в 5-50 раз, т.е. к одному объему спермы приливают 4-49 объемов разбавителя. В одной дозе должно быть не менее 10 млн. спермиев с прямолинейно-поступательным движением.
– барана – в 2-4 раза (1:1–1:3)- 80 млн. спермиев.
– жеребца – 2-4 раза (3 млрд. спермиев).
– хряка – 2-9 (1:1-1:9) (3 млрд. спермиев).