Отбор коров-доноров основывается на генетическом превосходстве по молочной продуктивности и хороших репродуктивных качествах.
Животные, признанные донорами, должны быть здоровыми, с ненарушенной воспроизводительной функцией, иметь среднюю или заводскую упитанность и нормальный метаболический профиль. Наиболее подходящий возраст – 4-9 лет. Телок и старых коров не используют, т.к. у них низкий суперовуляторный ответ на обработку гонадотропинами.
Коров-доноров ставят на суперовуляцию через 60 дней после отела. При этом их тщательно обследуют, чтобы исключить эндометрит и др. гинекологические заболевания. Обычно эмбрионы получают 2-3 раза, с интервалом 50 дней, после чего корову возвращают в стадо для естественного воспроизводства. Максимально возможное число суперовуляций – 8. От одной коровы в США за 8 суперовуляций получили 63 полноценных эмбриона.
На протяжении всего срока использования донору обеспечивают нормированное кормление, ежедневно предоставляют активный моцион.
В качестве реципиентов используют телок 16-18 месячного возраста, имеющих живую массу 340-410 кг, или молодых коров. Они должны иметь хороший физиологический статус, быть совершенно здоровыми. На каждого донора надо иметь от 6 до 10 реципиентов, поскольку часть из них дает атипичные реакции на гормональную обработку.
Техника суперовуляции
Суперовуляция – один из ключевых вопросов технологии пересадки эмбрионов. Только после успешной суперовуляции получают достаточное количество эмбрионов для эмбриопересадок.
До конца 70-х годов суперовуляцию вызывали однократной инъекцией лиофилизированной сыворотки жеребых кобыл очищенной от баластных белков (ГСЖК). Недостаток ГСЖК – длительный период полураспада (около двух недель), а это отрицательно сказывается на миграцию оплодотворенных яйцеклеток. Было предложено применять ГСЖК в сочетании с антисывороткой.
Стандартная схема суперовуляции (по Маплетоф, 1982 г.)
14-й день – утро – антисыворотка СЖК; вечер – осеменение; 15-й день 10-й день – 2500 ЕД ГСЖК; 12-й день – простагландин ПГФ2α;– утро – осеменение; вечер –осеменение.
При обработке по приведенной схеме суперовуляций реагирует около 90% коров, получают в среднем 7,4 овуляции на донора.
Лучшие результаты дает применение фолликулостимулирующего гормона (ФСГ). В настоящее время налажено производство ФСГ – фоллитропина на Каунасском заводе эндокринных препаратов, однако, по биологической активности он значительно уступает импортному препарату.
Увеличить синхронность процесса овуляции можно применением гипофизарного лютеинизирующего гормона который включают в состав ФСГ (5:1) либо инъекцией в период индуцированной охоты гонадотропного РнГ (сурфагона).
Схема суперовуляции:
10-й день: утро – 6 мг ФСГ, вечер – 6 мг ФСГ
11-й день: утро – 6 мг ФСГ, вечер – 5 мг ФСГ
12-й день: утро – 3 мг ФСГ + 500 мкг эстрофана
вечер 3мг ФСГ + 250 мкг эстрофана
13-й день: утро – 2мг ФСГ, вечер – 2 мг ФСГ
14-й день: утро – вечер осеменение
15-й день: утро – осеменение + 15 мкг сурфагона, вечер – осеменение.
После такой обработки у двух коров-доноров за одно извлечение получили 23 эмбриона и все пригодные для пересадки.
Существует четкая положительная связь между уровнем молочной продуктивности и числом эмбрионов. Так от коров с удоем 8-9 тыс. кг молока в одно извлечение получили 7,1 эмбриона, или на 1,8 эмбриона больше по сравнению с коровами продуктивностью 6-7 тыс. кг.