Диагноз наследственный микросфероцитоз может быть выставлен при наличии типичных микросфероцитов (при диаметре эритроцитов менее 7 микрон) и снижении осмотической резистентности эритроцитов. Прямая проба Кумбса (прямой антиглобулиновый тест) обычно отрицательная. Как и при других ГА, в сыворотке крови повышен уровень ЛДГ и неконъюгированного билирубина, уровень Hb и гаптоглобина снижен. Отмечено снижение MCV, повышение MCHC, повышение количества гиперхромных эритроцитов. Количество ретикулоцитов повышено при гемолитическом кризе и может быть нормальным в период вне криза. Важное значение имеют показатели кривой Прайс-Джонса (процентное распределение эритроцитов по их диаметру: наблюдается сдвиг кривой влево в связи с наличием микросфероцитов). Для верификации диагноза выполняют количественное определение белков цитоскелетона методом электрофореза (метод SDS-PAGE); для определения мутаций генов протеинов мембраны используют молекулярный ДНК-анализ .